DiscoveRx HitHunterシリーズ

EFCテクノロジー概要

弊社と販売提携を行っているDiscoveRxのHitHunterシリーズは、ラジオアイソトープを使用しない独自のEnzyme Fragment Complementation（EFC）検出テクノロジーを用いています。特許取得済みのEFCテクノロジーは、機能がよく研究されている酵素β-ガラクトシダーゼ（β-Gal）を利用するもので、高感度検出かつ偽陽性シグナルを最小限に留めることのできるアッセイ法です。

EFCの原理模式図

EFCテクノロジーで使われる酵素受容体（EA：Enzyme Acceptor）および酵素供与体（ED：Enzyme Donor）と呼ばれる不活性な2種類のβ-Gal断片は、遺伝子組み換えにより構築されています。EDはラベルとして機能する短いペプチドで、種々の小分子やタンパク質と共有結合でき、ED融合タンパク質（ProLabelおよびProLink）として発現させることも可能です。EAはEFC β-Gal酵素ですが、EDのペプチド領域を欠損するため不活性となっています。

EFCテクノロジー基本原理

EA+Target-ED（ProLabel, ProLink）→活性β-Gal→シグナル検出

EFCテクノロジーは、シグナルの増幅や広いアッセイレンジを有し、またライセンス契約が不要ですので、スクリーニングに最適です。一般的な化学発光対応のプレートリーダーがあれば専用の機器を準備いただく必要がありません。ラジオアイソトープも一切使いません。

EFCテクノロジーを活用したDiscoveRxのHitHunterシリーズはキナーゼ、GPCRを含む複数の創薬発見のためのターゲットのアッセイに最適です。

Kinase Assay - HitHunter EFC assays

さまざまなアッセイ

DiscoveRxのHitHunterシリーズには、抗体ベースの蛍光偏光と化学発光（EFC技術）アッセイのキナーゼプラットフォームがあります。抗体不要のADP検出アッセイ、キナーゼ結合アッセイなどを提供していますので、キナーゼの活性を目的別に測定することができます。なお、DiscoveRxのHitHunterシリーズは、特別な測定装置が不要であり、短時間で再現性の高い検出結果を得ることができます。

ADP Hunter／ADP Quest Assay

ADP Hunterの原理

ADP HunterおよびADP Questは、ADPの産生をアッセイするキットです。ADP Hunterでは、幅広いADP濃度に対してのダイナミックレンジがあり、高活性のみならず低活性のキナーゼについてもHTSを行うことができます。一方、ADP Questでは、キナーゼの動態を解析することができます。

測定にはビーズや抗体を用いず、ターゲット酵素活性の増加がそのまま蛍光強度の増加に反映されます。

HitHunter ECF/FP Kinase Assay

キナーゼ活性と結合の図

HitHunterのKinaseアッセイでは、EFCによる検出に加え、特異的な抗体を使用した蛍光法により、キナーゼ活性を測定します。

なお、キナーゼの種類によって最適な測定条件が異なります。製品に添付された、一般的な添加剤や試薬がアッセイの性能に影響しない条件についての情報などを参考にしてください。

GPCR second messengers - HitHunter EFC Assays

GPCR

HitHunterのcAMPおよびcGMPシリーズではβガラクトシダーゼの産生を調整して抑制し、EFCテクノロジーを利用した競合反応により、細胞内のcAMP/cGMPを測定することが可能です。

DiscoveRxのHitHunterシリーズには、Gs、Giの測定のcAMPアッセイキット（EFC）の他、Gqの測定にはIP3アッセイキット（FP：蛍光偏光）などがあります。いずれのキットも細胞内のG-タンパク質共役型受容体（GPCR）の活性を、ホモジニアスでラジオアイソトープを使わない系で測定する、マイクロタイタープレートフォーマットになっております。